高效液相色谱

在20世纪60年代，由于气相色谱分析高沸点有机物质的局限性，为了分离不易蒸发的蛋白质和核酸等大分子，将气相色谱的理论和方法重新引入经典液体中色谱法。在20世纪60年代后期，Kirkland，Haber，Horvath，Hess，Ripsk等人开发出世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。
高效液相色谱使用更细粒度的固定相填充色谱柱，增加色谱柱中的平板数量，在高压下驱动流动相，使经典液相色谱分离需要几天甚至几个月才能完成几个小时。它甚至在几十分钟内完成。
1971年，柯克兰等人。出版了“液相色谱现代实践”一书，标志着高效液相色谱（HPLC）的建立。
在接下来的时期，高效液相色谱（HPLC）已成为最常用的分离和检测方法。广泛应用于有机化学，生物化学，医药，药物开发与检测，化学工程，食品科学，环境监测，商检和法律检验。
应用。高效液相色谱还极大地刺激了固定相材料，检测技术，数据处理技术和色谱理论的发展。
在20世纪60年代之前，使用大于100μm的填料颗粒，柱子的效率面临困难，后来研究人员利用颗粒固定相突破瓶颈。 Corkland和Hews成功制备了一种薄壳固定相，在玻璃微球表面具有多孔壳，实现了高速传质，为高效液相色谱的开发奠定了坚实的基础。
随着填料的粒度减小，实现了更高的柱效。 20世纪60年代，开发了气动放大泵，注射泵和低流量往复柱塞泵，但后者具有较大的脉冲信号，难以满足高效液相色谱的要求。
在20世纪70年代，往复式双泵恒流泵解决了这个问题。 20世纪70年代以后，柯克兰制备了一种全多孔球形硅胶，平均粒径仅为7μm，具有优异的柱效，逐渐取代无定形硅胶。
然后生产粘合的固定相以大大提高柱的稳定性，使其可以多次使用。 1970年以后，适合分离生物大分子的填料已成为研究的热点。
1980年以后，提高分离选择性成为色谱工作者的主要问题，人们越来越认识到改变流动相的组成是提高选择性的关键。高压 - 压力可达150~300kg / cm2。
色谱柱每米减压超过75 kg / cm2。高速 - 流速为0.1~10.0mL / min。
高效 - 板材数量可达5000 / m。在一列中同时分离多达100个组件。
高灵敏度 - 紫外检测器灵敏度高达0.01 ng。同时消耗较少的样品。
与传统的液相色谱相比，HPLC具有以下优点：快速 - 通常一个样品分析15至30分钟，一些样品甚至可在5分钟内完成。高分辨率 - 可选择固定相和流动相以实现最佳分离。
高灵敏度 - 紫外检测器高达0.01 ng，荧光和电化学检测器高达0.1 pg。可以重复使用色谱柱 - 使用单个色谱柱分离不同的化合物。
样品体积小且易于回收 - 样品在通过色谱柱后不会被破坏，可以收集或制备单个组分。 TLC和HPLC都是重要的方法。
TLC简单快速，成本低。其中一些是HPLC无法替代的。
例如，显影剂可以通过任何强试剂分离以实现预期目的。这些主要归功于专栏。
HPLC的极限是无法比拟的，因此TLC在中间控制，中草药鉴定，某些中草药的测定以及合成过程中反应程度的控制中起着不可替代的作用。 HPLC的特异性和准确性很高，某些TLC转化为HPLC是一种趋势。
从目前的国家标准以及以前的标准来看，HPLC方法的应用有很大的增加。在一次检查中，HPLC只能做一个样品，许多样品可以在TLC上同时进行扩增。
TLC的成本也较低。由于两者的不同特性，通常在实验中，首先进行TLC，并且挖掘出所需部分（用硅胶）用于HPLC。
或者，首先对纸进行色谱分离，然后将纸粉碎并进行HPLC。在HPLC中，随着固定相的发展，可以在足以维持生物化学活性的条件下完成分离。
HPLC已成为解决生化分析问题的最有前景的方法。高效液相色谱与结构仪器的结合是一个重要的发展方向。
液相色谱 - 质谱技术受到广泛关注，如氨基甲酸酯类农药和多环芳烃的分析;液相色谱 - 红外光谱也发展迅速，如通过环境污染分析测定水中的碳氢化合物，而不是在海水中测定。挥发性碳氢化合物导致环境污染分析的新发展。
同时，气相色谱 - 质谱法也被广泛使用。